韩春雨详解新版实验方法要点 称新旧实验方法无本质区别

时间: 2024-09-02 14:05:36 |   作者: 提升设备

  8月8日，河北科技大学副教授韩春雨向非营利性质粒共享信息库Addgene提交新版的详细实验方法，并补充了数项应当注意的问题。

  此前，韩春雨领导的课题小组发明新的基因编辑技术NgAgo－gDNA，被国内媒体誉为做出“诺奖级”实验成果。然而，论文发表两个月后，全球仍没有一家实验室对外宣布能够完全成功重复韩春雨的实验，多国科学家要求发表韩春雨论文的《自然-生物技术》介入调查并公开实验中的所有原始数据和实验条件，该期刊表示将按照既定流程来调查此事。

  10日，韩春雨独家回应南方都市报，表示其他科学家无法复制实验结果的原因，他也在研究，但目前不能随便下定论，必须有科学的结论才能发声。目前提交的新实验方法是在和其它科学家讨论之后得出的，其中最有价值的部分是提出了一些注意事项。

  5月2日，韩春雨课题组的论文《NgAgo DNA单链引导的基因编辑工具》在《自然-生物技术》网络版发表，随后引起了广泛关注。韩春雨小组得出的结果是以DNA来介导NgAgo（一种核酸内切酶）对靶向基因的识别从而进行基因编辑，被认为是基因编辑领域的一项重大突破。

  韩春雨因此走红网络，被许多人视为在普通学校也能做出一流科研成果、耐得住寂寞搞科研的典型样本。同时有观点认为，NgAgo将取代CRISPR成为新一代主流的基因编辑技术。不过，韩春雨本人对此相当谨慎。他曾在接受各个媒体采访时表示，NgAgo系统和CRISPR都为基因编辑应用提供了更好的工具和多样化的选择，各有各的用处。

  然而，在论文发表后的两个多月后，没有一家科研团队宣布成功重复出韩春雨的实验结果，使得这项新基因编辑技术受到极大的质疑。

  8月8日，河北科技大学副教授韩春雨向非盈利性质粒共享信息库Addgene网站提交新版的详细实验方法，南都记者看到，其中一些实验步骤与其在《自然-生命科学》中发表的论文有所不同。

  据“科学美国人”中文版《环球科学》的微信公众号“科研圈”介绍，新版实验步骤有几处变化：

  3.建议在质粒/gDNA共转染的时间从“24小时”变成了8小时、12小时或24小时后；

  此外，实验步骤之后还有“在实验前要仔细确认所使用的细胞株未被污染或污染已被彻底清除”、“在细胞消化和培养过程中要避开使用金属离子螯合剂 EDT。也可以在培养基中额外加入 5 mM或其他浓度的镁离子”等四条需要注意的几点。

  有研究者认为，新版实验步骤第三条提到的补转gDNA和第四条中缓冲液的变化，尤为关键。

  值得注意的是，实验步骤后补充的四条注意事项中， EDTA 再次被强调。据了解，EDTA是一种金属离子螯合剂，可以螯合镁离子，而根据韩春雨补充的说明，镁离子恰恰是 NgAgo 系统发挥作用的必要条件。有学者觉得，此前多国学者无法重复实验结果，或许就是EDTA“神不知鬼不觉”地产生了影响。

  此前，由于多国科学家无法重复出实验结果，有人质疑韩春雨在论文中隐瞒了实验的关键条件。 “《自然-生物技术》应该要求韩向公众公开他所有的原始数据和实验条件，这是学术期刊的义务。”质疑者之一的布尔焦说。

  新版方法刚刚公布，尚未有人公开声称调整后的方法有效。一位重复实验结果失败的国内研究者则对南都说，实验时确实没有注意到新版方法中涉及的细节，将在近期继续尝试。他对重复成功表示了审慎乐观。

  但在NgAgo的谷歌讨论组内，争议仍未止息。名为Jonathan Geisinger的用户觉得，新版实验方法并不具备足够的说服力。名为SL的用户则表示，问题的关键仍然在于韩春雨如何达到论文中21%-41%基因编辑效率，新步骤看起来不足以让那些重复实验失败的人将效率提高到20%以上。

  8月8日，《自然-生物技术》发言人称，将按既定流程调查韩春雨的研究。“已有若干研究者联系本刊，表示无法重复这项研究，”发言人说，“《自然-生物技术》对于人们提出的任何关于论文的疑虑都会认认真真地对待，并加以慎重考虑。”

  发言人同时表示，作为在自然科研旗下期刊发表论文的条件之一，作者须将材料、数据、代码和相关的实验流程及时向读者提供，不可加以不当限制。

  有研究者认为，韩春雨新公布的实验方法发生了变化，但这并不代表韩春雨违反《自然-生物技术》的要求，在此前的论文中隐瞒了实验的关键条件。

  以新步骤中缓冲液的变化为例，这名研究者说，基因编辑的实验中，用水和含有EDTA的0.5xTE做缓冲液都很常见，大多取决于研究者的个人习惯，可能正因为此，韩春雨在此前的论文中没有特别强调避免EDTA的影响。

  10日下午3时许，《自然》工作人员对南方都市报记者表示，目前韩教授没有将最新的实验方式提交给杂志社，因此不好发表评论。此外，对于期刊此前声明对韩春雨论文的调查，暂时没有可以对外公开的进展。

  独家对线日，韩春雨独家回应南方都市报，表示新提交的实验方法，当中最有价值的部分是提出了一些需要注意的几点，如避免细胞的污染。韩春雨称，这些新的实验方法是在和其它科学家讨论之后得出的，此前自己只是从自己的经验、习惯出发去撰写实验方法，对别人可能遇到的问题考虑不周全。

  韩春雨：第一个关于血清的品牌的改进并不重要，只要保证是热灭活的血清就可以；第二个补充DNA guide时间，这是要根据细胞的传代速度和蛋白表达时间来决定的。每个实验室里的细胞都不同，所以要根据实验用细胞的蛋白表达时间去补加DNA guide，这个是需要摸索的。而以前的方法是根据我当时的实验确定的；第三个改进，将缓冲液从含有 EDTA的TE换成PH8的水，还在于NgAgo需要镁离子，我们要尽量去掉所有含有EDTA的试剂。

  5月2日，韩春雨课题组的论文《NgAgo DNA单链引导的基因编辑工具》在《自然-生物技术》网络版发表；